¡ª¡ª8·ÖÖӵõ½¸ß´¿¶ÈRNA
²úÆ·×é·Ö£º
×é·Ý |
RN001(100´Î) |
Lysis Buffer |
60 ml |
Wash Buffer |
12ml |
Elution Buffer |
25ml |
RNA´¿»¯Öù(´øÊÕ¼¯¹Ü) |
100Ì× |
×¢£ºµÚÒ»´ÎʹÓÃǰ£¬ÐëÏòWash BufferÖмÓÈë48mlÎÞË®ÒÒ´¼¡£
²úÆ·ÓÅÊÆ£º
1¡¢¼òµ¥¿ìËÙ¡ª8min¼´¿ÉµÃµ½¸ßÖÊÁ¿µÄRNA;2¡¢¸ß´¿¶È¡ªRNA´¿¶È¸ß£¬ÎÞ½µ½â;
3¡¢¸ß²ú¡ªRNA²úÁ¿¸ßÓÚTrizol·¨;
4¡¢ËùÐèÑùÆ·ÉÙ¡ª×îµÍ¿ÉÈ¡5Íòϸ°û»ò1mg×éÖ¯ÑùÆ·;
5¡¢°²È«ÎÞ¶¾¡ª²»Ê¹Ó÷ӡ¢Âȷ¡¢Òì±û´¼¡¢DEPCË®µÈ£¬¶ÔÉíÌåÎÞº¦¡£
Trizol·¨È±ÏÝ£º
1¡¢²½Ö裺ʮ¼¸²½£»
2¡¢²Ù×÷ʱ¼ä£º´óÓÚ1.5Сʱ£»
3¡¢ÊÔ¼Á£ºÓж¾¡¢Ö°©¡¢ÓÐÒìζ¡£
ʵÑéÁ÷³Ìͼ£º
ʵÑé½á¹ûʾÀý
ͼ1. ±¾ÊÔ¼ÁºÐÓëTRIzol·¨´Ó²»Í¬ÊýÁ¿µÄ293Tϸ°ûÖÐÌáÈ¡µÄRNAµçÓ¾¶Ô±È£¨50 ¦ÌlÏ´ÍÑ£¬ÉÏÑùÁ¿5 ¦Ìl£©¡£M£º250bp DNA Ladder£»Ó¾µÀ1¡¢2£º±¾²úÆ·ÌáÈ¡3 ¡Á 105ºÍ6 ¡Á 105ϸ°û£»Ó¾µÀ3¡¢4£ºTRIzolÌáÈ¡3 ¡Á 105ºÍ6 ¡Á 105ϸ°û¡£¿É¼û£¬±¾ÊÔ¼ÁºÐÌáÈ¡RNAµÄ²úÁ¿¸ßÓÚTRIzol·¨¡£
ͼ2. ±¾ÊÔ¼ÁºÐÌáÈ¡µÄRNAÓÃNanodrop²âµÃµÄŨ¶ÈºÍOD260/280Îü¹â¶È±ÈÖµ¡£ÒÔÉϽá¹û±íÃ÷±¾ÊÔ¼ÁºÐ¿ÉÒԺܺõÄÌæ´úTRIzol·¨½øÐг£¹æµÄRNAÌáÈ¡£¬¶øÇÒÌáȡЧÂʸßÓÚTRIzol·¨£¬Í¬Ê±¾ßÓнϸߵĴ¿¶È¡£
ͼ3.±¾ÊÔ¼ÁºÐÓëTRIzol·¨µÄ¶Ô±È²âÊÔ¡£ÊµÑéÄÚÈÝ£º·Ö±ðÓñ¾ÊÔ¼ÁºÐºÍTRIzolÌáÈ¡RNA£¬Äæ×ªÂ¼¡¢qPCR¼ì²â293Tϸ°ûÖÐ4¸ö²»Í¬»ùÒòµÄmRNA±í´ïˮƽ¡£ÊµÑé½á¹û±íÃ÷£ºÊ¹Óñ¾ÊÔ¼ÁºÐµÃµ½ÁËÓÅÒìµÄ½á¹û£¬±ÈTRIzol·¨µÃµ½µÄ½á¹û¸üºÃ£¬Á½×é½á¹ûµÄÏà¹ØÏµÊý¿É´ïR2=0.9918¡£½áÂÛ£º±¾ÊÔ¼ÁºÐÄܹ»ºÜºÃµØÌæ´úTRIzol·½·¨½øÐÐϸ°ûRNAµÄÌáÈ¡£¬µÃµ½µÄ½á¹ûÓÅÓÚTRIzol·½·¨¡£